重案组刑警吴英雄【赵又廷 饰】在拯救客机后成为警界明星，出演各种警队宣传片风光无两一身的轻松自在。仿佛脱离了那些明争暗斗，勾心斗角，尔虞我诈的生意战场，只想把自己安静在另一个世界里是日，海港城陷入突然危机，高铁、跨海大桥等交通要道突发连环爆炸，吴英雄在追索嫌凶过程中与东区分局刑事侦查组刑警陈真【林更新 饰】结为搭档，又再度重逢被逼做人肉炸弹的通缉犯徐达夫【黄渤 饰】。原来，一号为“夜行者”的神秘组织绑架了徐达夫等通缉犯的家属，逼迫他们作为人肉炸弹将海港城通向外界的各通路炸毁，使海港城变为孤城，以释放生化病毒，执行毁灭城市的“枯草计划”。吴英雄和陈真为解救徐达夫妻子杜小晴【关颖 饰】并阻止枯草计划，与鉴识官蓝西英【张钧甯 饰】、黑鹰队成员黄世楷【修杰楷 饰】等人向夜行者发起挑战。